Создание модели раненой кожи овцы ex vivo, инфицированной бактериальным патогеном

Возьмите предварительно стерилизованный срез биопсии кожи, полученный из лба ягненка в среде, не содержащей антибиотиков.

Секция состоит из наружного эпидермиса и нижележащего слоя дермы.

Удалите среду и используйте буфер для промывки секции.

Сделайте круговой надрез в разрезе и снимите верхний слой. Это разрушает барьер, создавая раневое ложе на коже.

Перенесите поврежденные участки на проницаемую мембранную вставку в многолуночной пластине, содержащей среду, не содержащую антибиотиков.

Внесите на раневое ложе суспензию болезнетворных бактерий и инкубируйте.

Во время инкубации раневое ложе обеспечивает тканевую поверхность для прикрепления бактерий и питательные вещества для поддержки роста бактерий.

Это позволяет размножаться и распространяться бактериям по раневому ложу, создавая инфекцию.

Чтобы заразить образец кожи, приготовьте свежий 24-луночный планшет с 400 микролитрами предварительно подогретой среды, не содержащей антибиотиков, и добавьте 24-луночные вставки с помощью стерильных щипцов. Удалите носители с образцов кожи, промойте их 500 микролитрами стерильного PBS и удалите смывку.

С помощью стерильных щипцов аккуратно удерживайте образец на дне лунки. С помощью 4-миллиме