Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:22 мин. • July 8th, 2025
Возьмем смесь CRISPR РНК, или crRNA, и транс-активирующей crRNA или тракрРНК.
Нагрейте смесь и дайте ей остыть, способствуя спариванию оснований тракрРНК с крРНК с образованием направляющей РНК, или гРНК.
Добавьте молекулярные ножницы, называемые ферментами Cas9, которые связываются с гРНК, создавая комплексы.
Добавьте комплексы Cas9-gRNA к Natural Killer или NK-клеткам, взвешенным в растворе для электропорации.
Введение одноцепочечных молекул ДНК, которые помогают в транспортировке комплексов Cas9-гРНК.
Переложите смесь в кювету и проведите электропорацию, создав временные поры в мембране для проникновения комплексов в клетку.
ГРНК связывается с участком-мишенью в геноме, позволяя Cas9 расщеплять ДНК.
Белки репарации связываются в месте разрыва и присоединяются к ДНК, часто вызывая ошибки вставки или делеции пары оснований. Полученная модификация нарушает работу целевого гена, делая его нефункциональным.
Перенесите генетически модифицированные клетки в подходящую среду для дальнейшего анализа.
В день электропорации наполните одну колбу Т25 8 миллилитрами свежей питательной среды с добавлением 100 МЕ на миллилитр ИЛ-2 в расчете на экспериментальное клеточное состояние, и поместите
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео