Получение рекомбинантных живых аттенуированных вирусов гриппа для вакцин

Начните с двунаправленных плазмид, несущих кДНК, кодирующую определенные вирусные эссенциальные белки штамма гриппа, адаптированного к холоду.

Введение нового набора двунаправленных плазмид, содержащих гемагглютинин и модифицированную кДНК нейраминидазы из другого штамма гриппа.

Введите в эту смесь реагент для трансфекции и инкубируйте до образования комплекса с плазмидами.

Переносите эти комплексы на культивируемые эпителиальные клетки человека, чтобы обеспечить проникновение плазмиды в клетку.

Двунаправленные плазмиды с двумя промоторами в противоположной ориентации позволяют производить вирусные белки и соответствующую им РНК.

Инкубируйте клетки при более низкой температуре.

Вирусные белки и вирусные РНК самоорганизуются, образуя адаптированные к холоду рекомбинантные вирусы гриппа с пониженной репликацией в более теплых условиях.

Наложение на клетки MDCK, сверхэкспрессирующие сиаловую кислоту, и модифицированные ферменты трипсина, которые обеспечивают прикрепление вируса и проникновение внутрь клеток.

Инкубируйте при одной и той же температуре, чтобы вызвать репликацию и производство новых вирусов.

Центрифугируйте и соберите рекомбинантные живые ослабленные вирусы гриппа, готов