Трехмерная кокультуральная модель инфильтрации Т-клеток в опухолевых сфероидах

Начните с культурной пластины, содержащей агарозный слепок. Литой состав включает в себя посевную камеру с несколькими микролунками.

Каждая микролунка содержит сфероид опухоли в культуральной среде. Сфероиды представляют собой трехмерные агрегаты опухолевых клеток.

Сначала удалите среду, окружающую агарозный отлив. Затем удалите среду из гипса с одного угла посевной камеры, чтобы избежать потери сфероидов.

Введите суспензию опухолеспецифичных Т-клеток по каплям в посевную камеру, позволяя клеткам осесть в микролунках, содержащих сфероиды.

Затем добавьте питательную среду вокруг агарозного литья и инкубируйте планшет в физиологических условиях, чтобы получить сокультуру.

Во время инкубации Т-клетки окружают сфероид. Подмножество Т-клеток проникает в сфероид, в то время как другие остаются на периферии, создавая трехмерную модель совместного культивирования.

Чтобы создать кокультуру Т-клеток, повторно суспендируйте соответствующее количество Т-клеток в 190 микролитрах соответствующей среды для культуры Т-клеток на лунку и наклоните 12-луночный планшет так, чтобы можно было удалить среду для клеточной культуры, окружающую сначала отлитую агарозу, а затем в камере посева, не удаляя сфе