Оценка эффектов трансплантации фекальной микробиоты у мышей с дефицитом интерлейкина-10

Начните со сдержанной мыши, которой не хватает интерлейкина-10, противовоспалительного цитокина, что приводит к воспалению толстой кишки.

Возьмите шприц, наполненный фекальной взвесью, богатой разнообразными кишечными микробами, от здоровой мыши.

Далее приложите к шприцу ротовую трубку.

Вставьте эту трубку в рот, направляя ее вниз к животу мыши.

Теперь введите каловую суспензию непосредственно в желудок, позволяя ей постепенно достигать толстой кишки.

Попадая в толстую кишку, фекальные микробы размножаются и колонизируются, восстанавливая кишечные микробы.

Затем колонизированные микробы выделяют различные вторичные метаболиты.

Эти метаболиты помогают в производстве муцина, который восстанавливает эпителий толстой кишки и восстанавливает целостность кишечника.

В эпителии толстой кишки фекальные микробы и их метаболиты взаимодействуют с иммунными клетками.

Это взаимодействие заставляет иммунные клетки высвобождать противовоспалительные цитокины, что приводит к уменьшению воспаления толстой кишки у мышей с дефицитом интерлейкина-10.

Приготовьте стерильный раствор, добавив 10% раствор глицерина к обычному физраствору. Добавьте в коническую трубку по 10 миллилитров этого раствора на каждый грамм фекальных гранул. Гомогенизируйте эту смесь на низкой скорости три раза в течение 30 секунд, используя настольный гомогенизатор внутри вытяжного шкафа для ресуспендирования кала. Отфильтруйте каловую взвесь через два слоя стерильной ватной марли. Временно храните фильтрат в холодильнике до шести часов или упакуйте его в стерильные криогенные флаконы и храните в морозильной камере при температуре минус 80 градусов.

Тщательно очистите гомогенизатор или блендер в соответствии со стандартной процедурой. Разморозьте замороженную фекальную взвесь на льду, если используете замороженные образцы. Перемешайте размороженную фекальную взвесь путем вортексинга. Переложите свежую или размороженную фекальную суспензию в 1-миллилитровые шприцы. Взвесьте мышей и выберите правильный размер иглы для зонда и максимальный объем дозировки.

Проверьте иглу для зондажа, измерив длину от кончика носа мыши до нижней части грудины. Наполните шприц 10% глицерином в физрастворе или фекальной суспензии, и удалите пузырьки воздуха внутри шприца и иглы. Поместите одну клетку для мыши в шкаф биобезопасности, снимите пластиковую крышку клетки и оставьте металлическую стойку на месте.

Откройте металлическую стойку одной рукой. Возьмите одну мышь за хвост и положите ее на металлическую стойку. Держите мышь за хвост одной рукой, а большим и средним пальцами другой руки удерживайте животное, захватывая кожу на плечах. Аккуратно вытяните голову животного назад и удерживайте голову на месте одной рукой. Поместите иглу для зонда в верхнюю часть языка внутрь рта.

Аккуратно продвигайтесь вдоль верхнего нёба, пока игла не достигнет пищевода. Плавно проведите иглой одним движением. После того, как игла будет правильно размещена и проверена, медленно введите материал, надавливая на шприц, прикрепленный к иглу. После дозирования аккуратно вытяните иглу наружу. Отметьте мышь и верните ее в домашнюю клетку. Наблюдайте за животным в течение 5-10 минут, обращая внимание на признаки затрудненного дыхания или дистресса. Повторное наблюдение за мышами через 12–24 часа после трансплантации фекальной микробиоты.