Анализ in vitro для оценки противоопухолевой активности опухолеспецифичных CAR-Т-клеток

Возьмем многолуночный планшет, содержащий опухолевые клетки В-клеточной лимфомы, экспрессирующие В-клеточный специфический поверхностный антиген и фермент цитоплазматическую люциферазу.

Введите CAR-Т-клетки в выбранные лунки и инкубируйте. Клетки экспрессируют химерные антигенные рецепторы, или CAR, содержащие внеклеточный домен, нацеленный на опухолевый антиген и внутриклеточные сигнальные домены.

CAR связывается с опухолевым антигеном, индуцируя активацию CAR-Т-клеток.

Активированные клетки выделяют цитокины, которые способствуют противоопухолевой активности клеток, вызывая высвобождение токсинов.

Токсины проникают в опухолевые клетки и вызывают гибель клеток.

Раскрутите клетки вниз и изолируйте надосадочную жидкость. Количественное определение цитокинов для оценки активности CAR-Т-клеток.

Ресуспендируйте клетки в буфере, содержащем люциферин, биолюминесцентный субстрат.

При поступлении люциферин окисляется люциферазой в живых опухолевых клетках, излучая свет.

Измерьте биолюминесценцию для выявления сниженного сигнала в обработанных опухолевых клетках, подтверждающего цитотоксичность, опосредованную CAR-T-клетками.

Сначала засейте 10 000 сингенных мишенных CD19-положительных опух