Анализ in vitro для оценки цитотоксичности естественных клеток-киллеров в отношении раковых клеток

Возьмите многолуночный планшет, содержащий естественные киллеры, или NK-клетки, и раковые клетки. Контрольные лунки содержат только раковые клетки.

Центрифуга для облегчения клеточного контакта.

инкубировать. Активирующие рецепторы на NK-клетках связываются с поверхностными лигандами раковых клеток, заставляя NK-клетки выделять гранулы, содержащие цитотоксические молекулы.

Эти молекулы создают поры мембраны раковых клеток и вызывают апоптоз, высвобождая внутриклеточное содержимое, включая лактатдегидрогеназу или ЛДГ.

Добавьте моющее средство, чтобы лизировать раковые клетки в контрольных лунках для максимального высвобождения ЛДГ.

Центрифугируйте и перенесите порцию ЛДГ-содержащих надосадочной жидкости в планшет для анализа.

Добавьте реактив для анализа и инкубируйте.

ЛДГ превращает лактат в пируват, снижая уровень НАД+. Diaphoraze использует NADH для восстановления соли тетразола, образуя продукт формазана красного цвета.

Добавьте кислый раствор, чтобы остановить ферментативную реакцию.

Используйте считыватель микропланшетов для измерения абсорбции формазана в лунках.

Интенсивность формазана пропорциональна количеству лизированных раковых клеток в тестовой лунке, что указывает на