$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Присоедините к насосу шприц с дозирующей трубкой. В состав шприца входит смесь фотоинициатора и полиэстера, уникальная полимерная смесь.
Дозируйте смесь в вязкий водный раствор полимера на основе целлюлозы. Это вызывает разделение фаз, образуя полимерную сферическую структуру, называемую полипузырьком.
Ультрафиолетовое облучение активирует фотоинициатор, заставляя полимер сшиваться и образовывать оболочку, окружающую внутреннее ядро.
Затем вставьте иглу для введения вязкого раствора молекул, помеченных флуорофорами, в ядро полипузырька.
Облучите еще раз, чтобы восстановить целостность полипузырька. Сублимационная сушка, чтобы удалить лишнюю воду и восстановить полипузырь.
Чтобы проверить профиль высвобождения, инкубируйте полипузырь в буфере.
При контакте с водной фазой полимерная оболочка подвергается эрозии, тем самым образуя поры. Со временем эти поры соединяются между собой, высвобождая меченые молекулы.
Регулярно собирайте надосадочную жидкость и количественно измеряйте интенсивность флуоресценции.
Внезапное увеличение флуоресценции после продолжительной инкубации подтверждает задержку высвобождения.
Чтобы изготовить полипузырьки, сначала используйте 1-миллилитровую трансферную пипетку, чтобы добавить 800 микролитров 10% CMC в стеклянный флакон объемом 0,92 миллилитров. Чтобы синтезировать PCLTA, смешайте 1000 граммов на миллилитр 14 килодальтон PCL с 200 микролитрами DCM. Чтобы синтезировать PLGADA, смешайте 1000 граммов на миллилитр 5 килодальтон PLGADA с 200 микролитрами хлороформа.
Смешайте фотоинициатор с интересующей полимерной смесью в соотношении 0,005 к 1 и загрузите 200 микролитров полученного раствора в стеклянный шприц объемом 1 миллилитров, установленный на шприцевом насосе, соединенном с дозирующей трубкой из нержавеющей стали с внутренним диаметром 0,016 дюйма.
Используя микромотор для управления движением полимерной трубки вперед и назад, введите полимер в 10% CMC в стеклянном флаконе, чтобы сформировать полипузырьки и отверждать полипузырьки под ультрафиолетовым светом на длине волны 254 нанометра в течение 60 секунд со скоростью 2 Вт на квадратный сантиметр. Затем мгновенно заморозьте полипузырьки в жидком азоте на 30 секунд и лиофилизируйте носители в течение ночи при вакууме 0,01 миллибар и минус 85 градусах Цельсия.
Для центрирования интересующего груза в полипузыре смешайте груз с 5% CMC и вращателем в течение ночи, чтобы увеличить вязкость груза, прежде чем вручную ввести 2 микролитра грузовой смеси в полипузырь. Когда весь груз будет введен в организм, восстановите, мгновенно заморозьте и лиофилизируйте введенный полипузырь, как показано только что на рисунке.
На следующее утро с помощью щипцов отделите полипузырьк от высушенного КМЦ и промойте полипузырь деионизированной водой, чтобы удалить остатки КМЦ. Затем разрежьте полипузырь пополам и сфотографируйте половинки с помощью конфокальной микроскопии, чтобы убедиться, что груз центрирован.
Для высвобождения низкомолекулярного груза инкубируйте полипузырьки с центрированным акрифлавином и 400 микролитрами PBS при температуре 37 градусов Цельсия до соответствующей длины инкубации. В каждой экспериментальной временной точке собирайте надосадочную жидкость и добавляйте в флакон 400 микролитров свежего PBS. Затем используйте планшетный ридер для количественной оценки интенсивности флуоресценции собранной надосадочной жидкости.