Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 1:49 мин. • July 8th, 2025
Возьмите многолуночный планшет, содержащий сфероиды колоректального рака в питательной среде.
Сфероиды представляют собой трехмерные агрегаты раковых клеток, которые напоминают физиологическое микроокружение опухоли.
Удалите питательную среду и добавьте возрастающие концентрации бесклеточной надосадочной жидкости Lactobacillus, или LCFS, надосадочной жидкости культуры, полученной из культуры Lactobacillus, бактерии пищеварительного тракта.
LCFS лишен бактериальных клеток, но содержит активные метаболиты с противоопухолевой активностью, выделяемые бактериями.
Бактериальные метаболиты в LCFS взаимодействуют с раковыми клетками в сфероиде, вызывая апоптоз и приводя к гибели клеток.
Повреждение клеток приводит к нарушению морфологии сфероида.
Используя микроскоп, исследуйте сфероиды, обработанные LCFS, чтобы наблюдать увеличение гибели клеток с увеличением концентрации LCFS, что указывает на дозозависимую противоопухолевую активность бактериальных метаболитов.
Для лечения LCFS необходимо последовательно развести приготовленный размороженный стоковый раствор LCFS в свежей питательной среде до концентраций 25%, 12,5 и 6% и с помощью пипетки объемом 200 мкл тщательно удалить как можно больше надосадочной жидкости из каждой лунки покрытых культур клеточной линии колоректального рака.
Затем осторожно добавьте 200 микролитров питательной среды, дополненной LCFS, в трех экземплярах на каждый набор раковых клеток и верните планшет в инкубатор еще на 24-48 часов.