Анализ для оценки противоопухолевого действия надосадочной жидкости Lactobacillus Cell-Free

Возьмите многолуночный планшет, содержащий сфероиды колоректального рака в питательной среде.

Сфероиды представляют собой трехмерные агрегаты раковых клеток, которые напоминают физиологическое микроокружение опухоли.

Удалите питательную среду и добавьте возрастающие концентрации бесклеточной надосадочной жидкости Lactobacillus, или LCFS, надосадочной жидкости культуры, полученной из культуры Lactobacillus, бактерии пищеварительного тракта.

LCFS лишен бактериальных клеток, но содержит активные метаболиты с противоопухолевой активностью, выделяемые бактериями.

Бактериальные метаболиты в LCFS взаимодействуют с раковыми клетками в сфероиде, вызывая апоптоз и приводя к гибели клеток.

Повреждение клеток приводит к нарушению морфологии сфероида.

Используя микроскоп, исследуйте сфероиды, обработанные LCFS, чтобы наблюдать увеличение гибели клеток с увеличением концентрации LCFS, что указывает на дозозависимую противоопухолевую активность бактериальных метаболитов.

Для лечения LCFS необходимо последовательно развести приготовленный размороженный стоковый раствор LCFS в свежей питательной среде до концентраций 25%, 12,5 и 6% и с помощью пипетки объемом 200 мкл тщательно удалить как можно бол