Анализ для оценки противоопухолевого действия надосадочной жидкости Lactobacillus Cell-Free
JoVE Encyclopedia of Experiments
Иммунология
0 просмотров • 1:49 мин • July 8th, 2025
Возьмите многолуночный планшет, содержащий сфероиды колоректального рака в питательной среде.
Сфероиды представляют собой трехмерные агрегаты раковых клеток, которые напоминают физиологическое микроокружение опухоли.
Удалите питательную среду и добавьте возрастающие концентрации бесклеточной надосадочной жидкости Lactobacillus, или LCFS, надосадочной жидкости культуры, полученной из культуры Lactobacillus, бактерии пищеварительного тракта.
LCFS лишен бактериальных клеток, но содержит активные метаболиты с противоопухолевой активностью, выделяемые бактериями.
Бактериальные метаболиты в LCFS взаимодействуют с раковыми клетками в сфероиде, вызывая апоптоз и приводя к гибели клеток.
Повреждение клеток приводит к нарушению морфологии сфероида.
Используя микроскоп, исследуйте сфероиды, обработанные LCFS, чтобы наблюдать увеличение гибели клеток с увеличением концентрации LCFS, что указывает на дозозависимую противоопухолевую активность бактериальных метаболитов.
Для лечения LCFS необходимо последовательно развести приготовленный размороженный стоковый раствор LCFS в свежей питательной среде до концентраций 25%, 12,5 и 6% и с помощью пипетки объемом 200 мкл тщательно удалить как можно больше надосадочной жидкости из каждой лунки покрытых культур клеточной линии колоректального рака.
Затем осторожно добавьте 200 микролитров питательной среды, дополненной LCFS, в трех экземплярах на каждый набор раковых клеток и верните планшет в инкубатор еще на 24-48 часов.
Обзор
В данном исследовании изучается противораковое действие бесклеточного супернатанта Lactobacillus (LCFS) на сфероиды колоректального рака. Исследование демонстрирует, как бактериальные метаболиты в составе LCFS индуцируют апоптоз в раковых клетках, что приводит к их гибели и морфологическим изменениям в сфероидах.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Нейронаука
- Клеточная биология
- Исследования рака
Теоретические сведения
- Колоректальный рак представляет собой серьезную проблему для здравоохранения во всем мире.
- Трехмерные раковые сфероиды имитируют микроокружение опухоли.
- Lactobacillus известны своими пробиотическими свойствами и потенциальным противораковым действием.
- Понимание механизмов действия бактериальных метаболитов может привести к созданию новых методов терапии рака.
Цель исследования
- Оценить воздействие LCFS на сфероиды колоректального рака.
- Определить дозозависимую связь между концентрацией LCFS и гибелью раковых клеток.
- Изучить потенциал бактериальных метаболитов в качестве противоопухолевых агентов.
Используемые методы
- Подготовка сфероидов колоректального рака в многолуночном планшете.
- Воздействие на сфероиды LCFS в различных концентрациях.
- Микроскопическое исследование морфологии сфероидов и жизнеспособности клеток.
- Использование серийных разведений для оценки зависимости «доза — ответ».
Основные результаты
- Обработка LCFS привела к увеличению гибели клеток в сфероидах колоректального рака.
- Более высокие концентрации LCFS коррелировали с более выраженным нарушением морфологии сфероидов.
- Метаболиты, присутствующие в LCFS, индуцировали апоптоз в раковых клетках.
- Исследование подтверждает потенциал метаболитов Lactobacillus для терапии рака.
Выводы
- LCFS проявляет дозозависимую противоопухолевую активность в отношении сфероидов колоректального рака.
- Бактериальные метаболиты могут индуцировать апоптоз в раковых клетках.
- Данное исследование подчеркивает терапевтический потенциал пробиотиков в лечении рака.
Часто задаваемые вопросы
Значимость для промышленности
Оценка противоопухолевого действия бесклеточного супернатанта Lactobacillus (LCFS) на трехмерных сфероидах колоректального рака представляет собой физиологически релевантную систему для валидации мишеней на ранних этапах. Данный анализ позволяет снизить механистические риски путем количественного определения дозозависимого апоптоза, индуцируемого бактериальными метаболитами, что повышает прогностическую достоверность терапевтических стратегий на основе микробиома. Этот подход помогает в принятии решений по формированию портфеля препаратов, уточняя трансляционный потенциал пробиотических метаболитов в онкологических разработках.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранние этапы поиска и валидация мишени
- Позволяет проверять терапевтические гипотезы, касающиеся роли метаболитов микробиома в гибели раковых клеток.
- Обеспечивает функциональную валидацию мишеней путем демонстрации индукции апоптоза в релевантной заболеванию 3D-модели.
- Повышает прогностическую достоверность при отборе перспективных кандидатов на основе микробиома для онкологических портфелей препаратов.
Скрининг и разработка анализа
- Подготовка валидированных систем 3D-сфероидов для последующих этапов скрининга соединений.
- Стандартизация количественной оценки гибели клеток и морфологических нарушений в ответ на воздействие LCFS.
- Обеспечение воспроизводимой и масштабируемой оценки дозозависимой противоопухолевой активности для подготовки к скринингу.
Трансляционные и доклинические исследования
- Сопоставляет результаты исследований in vitro с моделями микроокружения опухоли, релевантными для заболевания, для обеспечения трансляционной преемственности.
- Поддерживает продвижение проекта с учетом рисков, предоставляя механистические доказательства апоптоза в доклинических моделях.
- Снижает риски онкологических программ на ранних стадиях за счет уточнения биологического воздействия метаболитов пробиотиков.
Интеграция конвейера и рабочих процессов
Данный анализ позволяет проводить оценку LCFS на стыке этапов первичного поиска и доклинической валидации, связывая проверку гипотез с идентификацией перспективных соединений в онкологических исследованиях.
- Открытия в биологии: Количественная оценка апоптоза и морфологических нарушений для выяснения механистических путей действия бактериальных метаболитов.
- Скрининг: Обеспечение стандартизированных и воспроизводимых результатов для сравнения концентраций и эффектов LCFS.
- Аналитика: Получение количественных показателей гибели клеток и целостности сфероидов для надежного сравнения условий.
- Трансляционные исследования: Связь результатов анализа 3D-сфероидов in vitro с выбором доклинических моделей и стратегиями поиска биомаркеров.
- Корпоративное использование: Создание многократно используемой платформы для анализа различных кандидатов, полученных из микробиома, в онкологии.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: повышает достоверность прогнозов и снижает механистическую неопределенность в исследованиях на стыке микробиома и онкологии.
- Операционная ценность: способствует стандартизации, воспроизводимости и масштабируемости анализов в научно-исследовательских группах.
- Стратегическая ценность: служит основой для принятия решений о продолжении или прекращении разработки (go/no-go) и повышает эффективность использования капитала за счет уточнения биологических рисков на ранних этапах.
- Влияние на портфель: поддерживает приоритизацию с учетом рисков и продвижение онкологических активов на основе микробиома.
Особенности реализации
- Требуется опыт работы с трехмерными (3D) культурами клеток и количественным анализом апоптоза.
- Необходим доступ к оборудованию для работы с многолуночными планшетами и инфраструктуре для микроскопии.
- Требуется межкомандная стандартизация протоколов подготовки сфероидов и дозирования LCFS.
- Может потребоваться адаптация для других типов рака или супернатантов, полученных из микробиома.
- Результат зависит от надежного количественного определения зависимости «доза-эффект» и морфологических конечных точек.
Часто задаваемые вопросы по биофармацевтике
Выделение циркулирующих опухолевых клеток в модели ортотопической мыши колоректального рака
Похожие видео
0 Просмотры
Подготовка и метаболических Assay 3-мерной сфероида Сопредседатель культур клеток поджелудочной железы и фибробластов
Похожие видео
0 Просмотры
Поколение высокопроизводительных трехмерных опухоли сфероидов для скрининга наркотиков
Похожие видео
0 Просмотры
Клоногенных Пробирной: прилипшие клетки
Похожие видео
0 Просмотры
Анализ колониеобразования: оценка эффективности противоопухолевых препаратов на колониеобразующих клетках рака легких
Похожие видео
0 Просмотры
Анализ КОЕ на основе метилцеллюлозы: метод определения влияния противораковых соединений на образование колоний в лейкозных клетках
Похожие видео
0 Просмотры
Анализ in vitro для оценки противоопухолевой активности опухолеспецифичных CAR-Т-клеток
Похожие видео
0 Просмотры
Поколение новой дендритно-клеточной вакцины с использованием меланомы и плоскоклеточных раковых стволовых клеток
Похожие видео
0 Просмотры
Оценка специфичности противоопухолевых препаратов
Похожие видео
0 Просмотры
Лактатдегидрогеназа Assay поглощение — Простой и надежный метод для определения активности сыпучих Autophagic поглощения в клетках млекопитающих
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 22 августа 2026