Разработка гуманизированной мышиной модели с клетками печени человека и иммунными клетками

Начните с мыши под наркозом с иммунодефицитом, у которой отсутствуют различные иммунные клетки.

Эта трансгенная мышь предварительно обрабатывается противовирусным и химиотерапевтическим средством. Противовирусное средство взаимодействует исключительно с вирусными белками, присутствующими в трансгенных клетках печени, способствуя их выведению.

Между тем, химиотерапевтический агент устраняет активно делящиеся стволовые клетки в костном мозге, создавая нишу для генерации иммунных клеток.

Препарируйте мышь и обнажите селезенку.

Возьмите клеточную суспензию клеток печени человека и гемопоэтических стволовых клеток-предшественников или ГСКК и введите их в нижний полюс селезенки.

Лигируйте селезенку над местом инъекции, чтобы ограничить клетки к нижнему полюсу и облегчить их поступление в кровоток мыши.

Закройте разрез.

Введенные клетки печени достигают ткани печени и образуют клетки печени человека в мышиной модели.

В костном мозге мигрировавшие ГСКК дифференцируются в различные иммунные клетки человека.

В результате разрабатывается двойная гуманизированная мышиная модель с клетками печени человека и иммунными клетками.

Сначала прикрепите один конец стерильной удлинительной трубки к игле 30-го калибра, а другой конец к шприцу объемом 1 миллилитр. Заполните шприц суспензией объединенных ГЭП и ГФХ. Вставьте шприц в выемку повторяющейся дозирующей пипетки и отрегулируйте дозатор так, чтобы дозировать по 10 микролитров в каждом прессе. Побрейте каждую мышь, как указано в текстовом протоколе, и потрите левую сторону тела каждой мыши 10% повидон-йода, а затем 70% изопропилового спирта.

С помощью ножниц типа Vannas сделайте небольшой разрез на коже, мышцах и брюшине слева от стенки брюшины, чтобы войти в брюшную полость примерно на 5 миллиметров ниже нижнего края грудной клетки. Найдите селезенку и с помощью щипцов слегка подтяните ее к операционной области для легкого доступа, а затем вставьте иглу 30-го калибра в нижний полюс селезенки.

Затем разблокируйте поршень дозирующей пипетки и выдайте 10 микролитров объема за один раз, с ограничением от 60 до 80 микролитров на селезенку. Медленно втяните иглу и зафиксируйте селезенку лигирующими зажимами с помощью аппликатора для лигирования. Затем с помощью аппликаторов с ватным наконечником, смоченных стерильным PBS, протолкните селезенку обратно в полость тела. Используйте прерывистый рисунок шва, чтобы закрыть мышечный слой брюшной стенки. Завершите закрытие кожи прерывистым швом с помощью нерассасывающихся швов.