Получение везикул плазматической мембраны из стволовых клеток костного мозга

0 views • 3:20 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Начните с культивирования стволовых клеток костного мозга.

Введите буфер трипсин-ЭДТА, чтобы отделить клетки и разбить клеточные сгустки, образуя одноклеточную суспензию.

Центрифугуем, затем удалите надосадочную жидкость. Повторно суспензируйте гранулу свежей средой.

Переложите суспензию в шприц и подсоедините его к блоку мембранного фильтра.

Нажмите на поршень и выбросьте фильтратсодержащую среду.

Отсоедините фильтр. Наполните шприц свежей средой. Снова подключите фильтр и быстро нажмите на поршень.

Давление жидкости вынуждает клетку приближаться к порам фильтра.

При этом образуется сферическая плазматическая мембранная везикула или PMV.

Эти везикулы содержат клеточные компоненты и органеллы, окруженные мембраной.

Исследуйте фильтрат под инвертированным фазово-контрастным микроскопом, чтобы увидеть полупрозрачные сферические везикулы.

Размеры везикул совпадают с размером пор фильтрующей мембраны, что подтверждает образование PMV.

Для получения PMV сначала культивируют PMSC мышей в полной культуральной среде DMEM в одной лунке шестилуночного планшета в увлажненном инкубаторе при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа. Когда клетки достигнут 90% конфлюенции, промойте лунку 0,5 миллилитрами PBS, не содержащего кальция, и отделите клетки 0,5 миллилитрами 0,25% трипсина-ЭДТА.

Через три минуты при 37 градусах Цельсия несколько раз постучите по тарелке ладонью, чтобы облегчить диссоциацию клеток и остановить переваривание 1 миллилитром питательной среды. Переложите клетки в 5-миллилитровую коническую пробирку для центрифугирования и повторно суспендируйте гранулу в 4 миллилитрах свежей питательной среды. Затем разделите клетки между двумя лунками нового шестилуночного планшета и верните планшет в инкубатор для клеточных культур на 24 часа.

На следующий день соберите клетки из одной лунки путем расщепления трипсина, как только что продемонстрировано, повторно суспендируя гранулу в 0,5 миллилитрах свежей питательной среды после сбора центрифугированием. Загрузите клетки в шприц с инсулином объемом 1 миллилитр, и прикрепите шприц к фильтрующему блоку. Быстро нажмите на поршень, чтобы выдавить ячейки через фильтр и сбросить выдавленную среду. Затем загрузите и пропустите через фильтр 0,5 миллилитров дополнительной питательной среды, как показано только что, собирая среду из второй экструзии.

Высадите 150 микролитров собранной среды в 35-миллилитровую стеклянную посуду с дном и дайте пузырькам отстояться около 10 минут. Затем подтвердите наличие PMV под инвертированным фазово-контрастным микроскопом, оснащенным ПЗС-камерой, с использованием объектива с 20-кратным увеличением.

11:11

Определение плазматической мембраны секционирования для периферически связанных белков

Related Videos

0 Views

09:57

Выделение и анализ прослеживаемых и функционализированных внеклеточных везикул из плазмы и твердых тканей

Related Videos

0 Views

02:57

Генерация дендритных клеток из костного мозга: метод получения дендритных клеток из костного мозга мыши

Related Videos

0 Views

02:18

Генерация нейрональных клеток из плюрипотентных стволовых клеток, полученных из крови

Related Videos

0 Views

03:58

Получение шванновских клеток, подобных клеткам, из стромальных клеток костного мозга

Related Videos

0 Views

09:08

Ретровирусное Трансдукция костного мозга клеток-предшественников для генерации Т-клеточного рецептора Retrogenic Мыши

Related Videos

0 Views

09:34

Получение везикул плазматических мембран из мезенхимальных стволовых клеток костного мозга для потенциальной заместительной терапии цитоплазмы

Related Videos

0 Views

09:05

Поколение большого числа миелоидного прародителями и дендритных клеток прекурсоров из мышиных костного мозга с помощью Роман ячейку Сортировка стратегия

Related Videos

0 Views

11:37

Протокол для передачи микроРНК в взрослого костного мозга-производные гемопоэтических стволовых клеток для включения клеточной инженерии, в сочетании с магнитной ориентации

Related Videos

0 Views

08:11

ГМ-не-ГМ генерация нейрональных клеток, полученных из крови

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026