Получение везикул плазматической мембраны из стволовых клеток костного мозга

Начните с культивирования стволовых клеток костного мозга.

Введите буфер трипсин-ЭДТА, чтобы отделить клетки и разбить клеточные сгустки, образуя одноклеточную суспензию.

Центрифугуем, затем удалите надосадочную жидкость. Повторно суспензируйте гранулу свежей средой.

Переложите суспензию в шприц и подсоедините его к блоку мембранного фильтра.

Нажмите на поршень и выбросьте фильтратсодержащую среду.

Отсоедините фильтр. Наполните шприц свежей средой. Снова подключите фильтр и быстро нажмите на поршень.

Давление жидкости вынуждает клетку приближаться к порам фильтра.

При этом образуется сферическая плазматическая мембранная везикула или PMV.

Эти везикулы содержат клеточные компоненты и органеллы, окруженные мембраной.

Исследуйте фильтрат под инвертированным фазово-контрастным микроскопом, чтобы увидеть полупрозрачные сферические везикулы.

Размеры везикул совпадают с размером пор фильтрующей мембраны, что подтверждает образование PMV.

Для получения PMV сначала культивируют PMSC мышей в полной культуральной среде DMEM в одной лунке шестилуночного планшета в увлажненном инкубаторе при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа. Когда клетки достигнут 90% конфлюенции, промойте