Пероральная доставка трансформированных дрожжевых клеток в иммунную систему кишечника мыши

Начните с ротовой пробирки, содержащей суспензию генетически трансформированных, ауксотрофных дрожжей, которые не могут производить нуклеотидное основание урацила.

Вставьте оральную трубку в рот сдерживаемой мыши и направьте ее вниз к животу.

Вводите дрожжевую суспензию непосредственно в желудок, позволяя ей в конечном итоге достичь тонкого кишечника.

Тонкая кишка содержит эпителиальные клетки, а нижележащие пейеровы участки богаты иммунными клетками.

Микроскладчатые клетки, специализированные эпителиальные клетки кишечника рядом с пейеровыми пятнами, поглощают дрожжевые клетки и интернализуют их в везикулы.

Эти везикулы перемещаются по клеткам и высвобождают дрожжевые клетки в нижележащий участок Пейера.

Выделите пейерову пластырь из принесенного в жертву кишечника мыши и получите однородную клеточную суспензию.

Культивируют эту клеточную суспензию на дрожжеселективной среде, содержащей урацил.

Ауксотрофные дрожжи используют урацил и размножаются с образованием колоний, подтверждая доставку трансформированных дрожжевых клеток в иммунную систему кишечника мыши.

После подготовки культур дрожжей по текстовому протоколу с помощью гемоцитометра определите концентрацию клеток, и отрегул