Генерация антиангиогенных опухолеассоциированных нейтрофилов

Возьмем, к примеру, опухоль меланомы мыши, содержащую опухолеассоциированные нейтрофилы, или ТАН.

ТАН проявляют повышенную активность фермента никотинамида фосфорибозилтрансферазы, или NAMPT, стимулируя ангиогенез, пролиферацию кровеносных сосудов в опухолях и способствуя росту опухоли.

Измельчите ткань и добавьте ферменты, чтобы разрушить тканевый матрикс, разрыхлив клетки.

Отфильтруйте суспензию через сетчатое фильтр и центрифугу, чтобы гранулировать клетки.

Добавьте лизирующий буфер для лизирования эритроцитов, затем центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость, содержащую клеточный мусор.

Вводить антитела для блокирования клеточных Fc-рецепторов, тем самым избегая неспецифического иммуноокрашивания.

Введите меченный флуорофором коктейль антител, специфичный для поверхностных маркеров на TAN, и краситель для различения мертвых клеток.

С помощью FACS изолируйте меченые флуорофорами жизнеспособные TANs и перенесите их на микропланшет.

Добавьте в выбранные лунки ингибитор, блокирующий активность NAAMPT, и инкубируйте.

Используйте клетки для оценки их способности стимулировать ангиогенез. Обработанные ингибиторами TANs демонстрируют сниженный ангиогенез по сравнению с необработ