Анализ тестового β-глюкана в качестве стратегии иммунотерапии против клеток рака головного мозга

Возьмите предметное стекло с многолуночной камерой, содержащее монослои микроглии.

В тестовой лунке покройте клетки β-глюканом. В контрольной колодке хорошо отсутствует β-глюкан. Инкубировать.

В тестовой лунке β-глюканы, ассоциированные с патогенами, связываются со специфическими рецепторами на микроглии, вызывая фагоцитоз β-глюкана.

Это активирует микроглию, производя и высвобождая биоактивные молекулы, такие как реактивные оксиданты и цитокины, в среду.

Соберите из лунок среды, содержащие биологически активные молекулы, и отфильтруйте их, чтобы удалить мусор и β-глюкан.

Замораживайте среду при низких температурах, чтобы сохранить биологическую активность биологически активных молекул.

Затем разморозьте и добавьте среду в предметное стекло с многолуночной камерой, содержащее монослои клеток рака мозга. Инкубировать.

Биоактивные молекулы запускают клеточные сигнальные пути, уменьшая пролиферацию раковых клеток и вызывая апоптоз.

Снижение пролиферации раковых клеток и увеличение апоптоза позволяют предположить, что β-глюканы являются агентами, способствующими противоопухолевым свойствам микроглии против раковых клеток мозга.

Активируйте микроглию, покрывая клетки микроглии BV-2 в течение 72 часов концентрацией 0,2 мг на миллилитр четырех различных бета-глюканов, выделенных из P. ostreatus, P. djamor, G. lucidum и H. erinaceus. Через 72 часа соберите надосадочную жидкость с помощью пипетки, а оставшийся объем пропустите через шприцевой фильтр размером 0,20 мкм. Затем заморозьте надосадочную жидкость при температуре -80 градусов Цельсия не менее чем на 24 часа. Для лечения GL261 с помощью предварительно активированной среды, кондиционированной микроглией, добавьте 250 микролитров обработанной бета-глюканом микроглиальной среды в 80% сливающихся клеток GL261 в течение 72 часов.