Визуализация трансгенных бета-клеток у иммунодефицитной мыши с диабетическими спленоцитами

Начните со сдержанной мыши с иммунодефицитом NOD, у которой отсутствуют иммунные клетки и которая склонна к диабету.

Этой мыши предварительно вводят трансгенные бета-клетки поджелудочной железы, которые вырабатывают инсулин и экспрессируют ферменты люциферазы.

Возьмите шприц, содержащий предварительно обработанные спленоциты, полученные от мыши-диабетика. К спленоцитам относятся аутореактивные Т-клетки, обладающие способностью распознавать пептиды инсулина.

Вводите эти спленоциты в хвостовую вену мыши.

Спленоциты циркулируют и достигают поджелудочной железы, где аутореактивные Т-клетки распознают пептиды инсулина на бета-клетках и активируются.

Эти активированные клетки высвобождают цитотоксические молекулы, инициируя разрушение бета-клеток посредством аутореактивности.

Далее введите субстрат люциферазы в брюшину мыши. Субстрат диффундирует в этой области и проникает в бета-клетки.

Внутри клеток субстрат взаимодействует с ферментами люциферазой, производя люминесценцию.

Используя биолюминесцентную систему визуализации, делайте снимки через равные промежутки времени

Постепенное снижение люминесценции свидетельствует о разрушении трансгенных бета-клеток вследствие аутореактивности.

Р