Внутрикожная иммунизация живыми аттенуированными спорозоитами на мышиной модели

Начните с мыши, находящейся под наркозом, под стереомикроскопом, с нижней стороной одного из ушей мыши, закрепленной на сцене с помощью клейкой ленты.

Глаза покрывают мазью, чтобы предотвратить их пересыхание.

Возьмите с собой шприц, наполненный спорозоитной стадией малярийного паразита Plasmodium. Живые спорозоиты ослаблены радиацией, что делает их незаразными.

С помощью стереомикроскопа введите в верхнюю часть уха, проникая в самый внешний слой эпидермиса и высвобождая спорозоиты в дерму.

Перед снятием иглы ненадолго подержите иглу на месте, чтобы предотвратить обратный поток введенной суспензии.

Видимая припухлость в месте инъекции, называемая папулой, подтверждает успешную инъекцию.

Выполните несколько инъекций в одно и то же ухо.

Отпустите введенное ухо и повторите инъекции в другое ухо.

После инъекции дайте мыши восстановиться.

Введенные спорозоиты вызывают иммунный ответ, подготавливая иммунную систему против паразита.

Перед введением спорозоитов подтвердите надлежащий уровень седации подопытного животного путем пощипывания пальцев ног и нанесите глазную мазь для предотвращения высыхания роговицы. Затем, работая быстро, с помощью прозрачной ленты аккуратно зафиксировать вентральную сторону ушной раковины под стереомикроскопом, и загрузить шприц объемом 10 микролитров, оснащенный иглой 35-го калибра, 0,6 микролитра ресуспендированных паразитов.

Затем осторожно введите иглу скошенной стороной вверх под эпидермис на тыльной стороне уха и введите 0,15 микролитра спорозоитов в это место. В месте инъекции будет наблюдаться характерная папула. После введения дермы еще три раза, как только что продемонстрировано, осторожно снимите ленту и наблюдайте за мышью до полного ее восстановления.