Получение одиночных положительных CD8 Т-клеток из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

Культура индуцировала плюрипотентные стволовые клетки на питающем слое стромальных клеток на желатиновой матрице.

Питательный слой имитирует естественную внеклеточную среду, направляя дифференцировку стволовых клеток в куполообразные органоиды, содержащие гемопоэтические клетки-предшественники.

Добавьте ферменты для диссоциации совместно культивируемых клеток.

Переложите клетки в свежую посуду, покрытую желатином, для адгезии стромальных клеток.

Соберите неадгезивные клетки-предшественники гемопоэтических клеток в среду для дифференцировки.

Культивируйте их на свежем питающем слое, чтобы стимулировать дифференцировку клеток-предшественников в двойные положительные Т-клетки с рецепторами CD4 и CD8 и двойные отрицательные Т-клетки, лишенные обоих рецепторов.

Переложите клетки в пробирку. Инкубируйте их с магнитными шариками, содержащими CD4-специфические антитела, которые избирательно помечают двойные положительные Т-клетки.

Используйте магнитный сепаратор для выделения двойных положительных клеток и культивируйте их на свежем слое питания.

Дополните смесью цитокинов и антител для стимуляции клеток, индуцируя подавление рецепторов CD4 и способствуя их дифференцировке в CD8-одиночные