Методика культивирования нейронов гиппокампа мыши

Возьмите собранного детеныша мыши гиппокамп в буфер.

Разрежьте гиппокамп на более мелкие фрагменты и перенесите их в коническую трубку.

Промойте салфетку с буфером. Как только осядут осядки, удалите буфер. Теперь добавьте свежий буфер и трипсин.

Во время инкубации трипсин, протеолитический фермент, переваривает внеклеточный матрикс ткани, расслабляя нейроны гиппокампа.

Промойте переваренную ткань буфером.

Как только осядут осядки, удалите буфер. Добавьте свежий буфер и многократно пипетируйте ткань, чтобы механически диссоциировать ее, получая одноклеточную суспензию.

Как только непереваренная ткань осядет, перенесите клеточную суспензию на покрытые поли-L-лизином покровные стекла с восковыми подложками внутри культуральной пластины, содержащей среду.

Клетки прикрепляются к поверхностям, покрытым поли-L-лизином, посредством электростатических взаимодействий.

Теперь поместите прикрепленные к нейронам покровные стекла лицевой стороной вниз в чашку, содержащую корковые глиальные или ненейрональные клетки в среде, не содержащей сыворотки.

В культуре восковые подложки предотвращают прямой контакт между нейронами и глиальными клетками, создавая микросреду, в которой факторы, секретируемы