Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 5:51 мин. • July 8th, 2025
Возьмем мозг трансгенного мышиного щенка.
Удалите мозжечок и рассеките головной мозг. Отделите кортико-гиппокампальную ткань, содержащую возбуждающие нейроны, экспрессирующие флуоресцентные белки.
Перенесите ткань в культуральную пластину, содержащую буфер.
Измельчите ткань и переложите ее в пробирку с папаином.
Папаин переваривает внеклеточный матрикс ткани, расслабляя клетки, в том числе нейроны.
Перенесите переваренную ткань в пробирку с белками BSA, останавливая ферментативную активность и предотвращая повреждение клеток.
Механически диссоциируют ткани, высвобождая клетки.
Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость, содержащую мусор и ферменты.
Ресуспендируйте клетки в нейронных средах с низкой флуоресценцией и отфильтруйте через клеточный фильтр, удаляя клеточные агрегаты.
Выполните сортировку клеток, активируемых флуоресценцией, чтобы идентифицировать и отсортировать флуоресцентные нейроны.
Перенесите отсортированные нейроны в микроцентрифужную пробирку и центрифугу. Ресуспензируйте нейроны в нейронной среде.
Засейте нейроны на покровных стеклах, покрытых поли-L-лизином, в многолуночном планшете. Нейроны прилипают к покрытым поверхностям.
Добавьте нейронные среды. Инкуби
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео