Получение нейронных предшественников из эмбриональных стволовых клеток в бессывороточных монослойных культурах

Начните с культивирования эмбриональных стволовых клеток мыши.

Промойте клетки буфером, чтобы удалить среду и остатки клеток.

Добавьте коктейль ферментов, чтобы отделить клетки от поверхности колбы.

Добавьте среду, чтобы остановить ферментативную активность и соберите клетки в пробирку. Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость, содержащую ферменты.

Ресуспендируйте клетки в бессывороточных питательных средах нейронов.

Высадите клетки на многолуночные лунки, покрытые желатином.

инкубировать. Эмбриональные стволовые клетки прилипают к поверхности, покрытой желатином. Составляющие среды, включая питательные вещества, факторы роста и гормоны, способствуют пролиферации клеток и образуют монослой.

При такой плотности клеток эмбриональные стволовые клетки продуцируют и высвобождают оптимальные уровни факторов роста и цитокинов.

Эти молекулы запускают внутриклеточные сигнальные пути, способствуя дифференцировке эмбриональных стволовых клеток в нейральных предшественников.

Смешайте желатин с 500 миллилитрами теплого PBS и накройте дно контейнера для клеточных культур ровно настолько, чтобы поверхность была покрыта. Пока желатин покрывает его, промывайте субсливающуюся культуру эмбри