Дифференцировка нейронных стволовых клеток человека в 3D-культуру с использованием пористого каркаса

Начните с многолуночной пластины, содержащей пористую вставку, которая удерживает полистирольный каркас, обладающий трехмерной пористой структурой.

Добавьте этанол, чтобы увлажнить каркас, и промойте его этим средством.

Ввести среду, содержащую белок внеклеточного матрикса, ламинин. Инкубируйте, чтобы ламинин покрыл каркас.

Посадите нервные стволовые клетки человека в нейронную среду, содержащую факторы роста, на каркас, покрытый ламинином.

Инкубируйте для миграции стволовых клеток в пористый каркас, где ламинин способствует адгезии клеток к каркасу.

Клетки используют факторы роста и размножаются в этом каркасе.

Добавьте нейронную среду без фактора роста и регулярно заменяйте отработанную среду для поддержания жизнеспособности клеток.

Отсутствие факторов роста стимулирует дифференцировку стволовых клеток в нейральные клетки-предшественники.

Со временем нервные отростки этих клеток-предшественников удлиняются, что позволяет вести разнонаправленный рост клеток и формировать трехмерную культуру.

Регидратируйте каркасы, добавив в каждую лунку 12-луночной пластины Альветэкс по 2 миллилитра 70% этанола, приготовленного с использованием воды для полива. Избегайте прикосновения к каркасам,