Метод ко-культивирования для дифференцировки нейронных клеток-предшественников человека в нейроны

Возьмем культуру человеческих нейронных клеток-предшественников, или NPC, поддерживаемых на внеклеточном матриксе.

NPC спроектированы таким образом, чтобы экспрессировать флуоресцентный белок.

Выбросьте среду и промойте ячейки, чтобы удалить остатки среды.

Инкубируйте культуру с ферментами, которые нарушают работу матрикса, диссоциируя клетки.

Переложите отделенные клетки в пробирку и добавьте среду для нейтрализации ферментативного действия.

Центрифуга для гранулирования клеток, отбрасывания надосадочной жидкости и ресуспендирования NPC в среде для дифференцировки нейронов.

Перенесите NPC в устоявшуюся совместную культуру мышиных астроцитов и нейронов коры головного мозга крысы.

Факторы роста, высвобождаемые созданной кокультурой, наряду с межклеточными контактами NPC с корковыми нейронами и астроцитами, способствуют дифференцировке NPC в зрелые нейроны.

Зрелые нейроны демонстрируют расширенные клеточные процессы и образуют синаптические связи.

Под конфокальным микроскопом используйте сигнал от флуоресцентных белков для визуализации нейронов, полученных от NPC человека.

После создания индуцированных плюрипотентных стволовых клеток или ИПСК индуцируйте и поддерживайте клетки в каче