Метод in vitro для получения органоидов человеческого мозга

Начните с культуры нейросфер, свободно плавающих кластеров нейроэпителиальных клеток-предшественников.

Перенесите эти нейросферы на закладной лист.

Удалите носитель. Добавьте в каждую нейросферу по капле внеклеточного мембранного матрикса, содержащего белки и факторы роста.

Инкубируйте матрикс, чтобы она затвердела, встраивая в нее нейросферы.

Теперь перенесем встроенные в матрицу нейросферы с помощью нейросферных сред на культуральную пластину, содержащую нейросферные среды.

инкубировать. Матрикс внеклеточной мембраны и его составляющие способствуют дифференцировке нейроэпителиальных клеток-предшественников в нейроэпителиальные клетки, которые пролиферируют и образуют заполненные жидкостью люмены.

После инкубации перенесите нейросферы в колбу, содержащую предварительно нагретые органоидные среды мозга. Инкубируйте с перемешиванием для улучшения диффузии кислорода и питательных веществ, способствуя росту клеток.

Факторы роста и низкомолекулярные ингибиторы в средах способствуют нейронной дифференцировке и развиваются в клетки определенных областей мозга, образуя зрелые органоиды мозга.

Для начала этой процедуры соберите нейросферы с помощью микропипетки объемом 200 микролитров, исп