Генерация индуцированных плюрипотентных органоидов головного мозга, полученных из стволовых клеток

Возьмем, к примеру, колонии индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, или ИПСК, культивируемых на поддерживающей матрице.

Добавьте раствор, содержащий ферменты, чтобы диссоциировать колонии на отдельные клетки.

Перенесите клетки в пробирку, центрифугируйте их и выбросьте надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте ИПСК в питательной среде.

Перенесите клетки в микропланшет, содержащий биосовместимые полимерные волокна.

Центрифуга для принудительного агрегирования iPSCs, образующих эмбриоидные тельца, или EB, на полимерном каркасе.

Переход к среде нейронной индукции, способствующей пролиферации и дифференцировке ИПСК в нейральные стволовые клетки, клетки-предшественники и незрелые нейроны.

После инкубации клетки подвергаются самоорганизации.

Поместите эмбриоидные тельца на лист с ямочками и добавьте капли, содержащие белки внеклеточного матрикса.

Инкубируйте для затвердевания матрицы, внедряя EB.

Перенесите БЭ в микропланшет, содержащий питательную среду для нейронов. Инкубировать.

БЭ подвергаются клеточной пролиферации, образуя выпячивания и почкования, и дифференцируются в зрелые нейроны, образуя церебральные органоиды.

Отсадите среду с помощью пипетки, и один раз промойте клетки