Выделение микроглии из коры головного мозга взрослой мыши

Возьмем свежесобранную кору головного мозга мыши.

Нарежьте ткань на мелкие фрагменты. Перенесите их в охлажденный гомогенизатор, содержащий буфер с ингибиторами РНКазы и ДНКазами.

Оптимально гомогенизируйте ткань для высвобождения клеток в суспензию, избирательно сохраняя микроглию благодаря ее способности противостоять силам сдвига и поддерживать жизнеспособность мембраны, устраняя при этом нейроны и другие глиальные клетки.

Кроме того, ингибиторы РНКазы разрушают РНКазы, в то время как ДНКазы разрушают любую загрязняющую ДНК.

Пропустите клеточную суспензию через клеточное ситечко, чтобы удалить остатки ткани.

Перенесите клеточную суспензию в трубку. Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость, содержащую ферменты. Восстановите суспендию ячеек в буфере.

Добавьте антимиелиновые магнитные микрошарики. Эти микрогранулы нацелены на белок миелина, связывая остатки миелина и олигодендроциты.

Загрузите смесь клеточных шариков в истощающую колонну, состоящую из матрицы с ферромагнитными сферами.

Под действием приложенного магнитного поля связанные с микрогранулами миелиновые остатки и олигодендроциты удерживаются внутри колонки, в то время как микроглиальные клетки проходят через нее.