Развитие кокультуры нейронов и макрофагов in vitro

Начните с изолированных нейронов ганглия дорсального корешка мыши в питательной среде.

Посадите их на многолуночную пластину с полимерным покрытием, чтобы способствовать прикреплению нейронов.

Затем возьмите вскрытую усыпленную мышь и введите ледяной PBS в ее брюшную полость.

Мягко массируйте брюшину, чтобы вытеснить макрофаги со стенки брюшины.

Сожмите мышь, чтобы собрать перитонеальную жидкость и обработайте ее буфером для лизиса, чтобы избирательно лизировать эритроциты, которые проявляются как загрязнители. Центрифугируйте и ресуспендируйте клетки в питательной среде.

Перенесите макрофаги в пористую вставку, расположенную внутри лунки, содержащей культивируемые нейроны.

Такое совместное культивирование позволяет нейронам и макрофагам находиться в непосредственной близости.

Обработайте ко-культуру db-cAMP и инкубируйте для облегчения его проникновения в клетки. Это активирует нейроны для секреции сигнальных молекул.

Эти сигнальные молекулы, наряду с db-cAMP, побуждают макрофаги принимать прорегенеративный фенотип и секретировать важные факторы для роста нейронов.

Перед установкой культуры предварительно покройте 6-луночный планшет поли-D-лизином и ламинином. Затем инкубируйте 6-