Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:32 мин. • July 8th, 2025
Начните с циклического аденозинмонофосфата, или цАМФ, сигнальной молекулы, которая регулирует различные клеточные функции. Добавьте цАМФ к сокультуре нейронов и макрофагов.
Молекулы цАМФ из среды и факторы роста из нейронов запускают активацию макрофагов.
Перенесите вкладыш с активированными макрофагами в другую лунку, содержащую питательную среду для макрофагов.
Здесь макрофаги выделяют цитокины и хемокины в среду, образуя кондиционированную среду или КМ.
Центрифугируйте CM для гранулирования ячеистых компонентов.
Перенесите надосадочную жидкость и фильтр, чтобы удалить клеточный мусор.
Добавьте собранный КМ в культуру нейронов. Цитокины и хемокины в собранных КМ способствуют расширению нейронов.
Добавьте охлажденный параформальдегид для фиксации клеток.
Добавьте блокирующий буфер, чтобы избежать неспецифического связывания антител. Промойте, чтобы удалить остатки буфера.
Применяйте первичные антитела, нацеленные на цитоскелетные белки нейронов. Промойте, чтобы удалить несвязанные антитела.
Добавьте красные фторконъюгированные вторичные антитела, которые связываются с первичными антителами. Промойте, чтобы удалить несвязанные антитела.
С помощью флуоресцентной микроскопии визуализ
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео