Выделение и бактериологическое исследование первичных нейронов и глии из мочевого пузыря крысы

Возьмем усыпленную крысу.

Вскройте брюшную полость, иссеките мочевой пузырь и погрузите его в буфер.

Разрежьте мочевой пузырь и удалите прилипший жир и остатки тканей.

Переложите мочевой пузырь в пробирку, содержащую буфер, центрифугу и удалите мусор.

Поместите ткань в раствор, содержащий коллагеназу, и пропустите через мясорубку. Добавьте больше коллагеназы, чтобы разрушить внеклеточный матрикс, разрыхляя клетки.

Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость. Добавьте трипсин, чтобы нарушить межклеточные соединения, высвобождая клетки.

Добавьте промывочную среду, содержащую белки, чтобы инактивировать трипсин, затем центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте клетки в среде, отфильтруйте их, чтобы удалить агрегаты, и получите одноклеточную суспензию.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость. Повторно суспендируйте клетки в среде.

Наклейте клетки на покрытые покровные стекла, чтобы облегчить прикрепление нейронных и глиальных клеток. Удалите неприкрепленные ячейки.

Добавьте нейронную среду, содержащую факторы роста, чтобы способствовать клеточному созреванию, создавая первичную нейрональную и глиальную культуру.

Начните с того, что поместите крыс на