JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 2:12 мин • July 8th, 2025
Начните с многолуночного планшета, содержащего генетически измененные астроциты. Эти клетки приклеиваются к покровному стеколу, помещенному в астроцитарную среду.
Эти генетически модифицированные клетки экспрессируют факторы трансформации, которые заставляют их превращаться в нейроны. Этот процесс называется нейронным перепрограммированием.
Возьмем среду для дифференцировки нейронов, содержащую определенные молекулы, и добавку B27. Вместе эти компоненты обеспечивают необходимые питательные вещества и факторы для дифференцировки.
Замените астроцитарную среду средой для дифференцировки нейронов.
Инкубируйте астроциты в течение необходимого времени.
Во время инкубации факторы трансформации, экспрессируемые астроцитами, запускают последовательность молекулярных событий, которые позволяют превратить астроцит в нейрон
.Преобразованные нейроны имеют меньшие клеточные тела и удлиненные отростки, похожие на типичные нейроны.
Приготовьте среду для дифференцировки нейронов, добавив один миллилитр добавки B27 к 49 миллилитрам основной питательной среды. Через 24-48 часов, в зависимости от того, были ли клетки трансдуцированы или трансфицированы, замените астроцитарную среду на одну миллилитровую среду для дифференцировки нейронов на лунку. Культивируйте клетки при температуре 37 градусов Цельсия с 9% углекислым газом.
Для повышения эффективности перепрограммирования добавляйте в среду для дифференцировки нейронов Форсколин и дорсоморфин до конечной концентрации 30 микромоль и один микромоль соответственно при замене среды астроцитов средой для дифференцировки. При выборе лечения клеток Форсколином и Дорсоморфином предоставьте вторую дозу дорсоморфина через два дня после первоначального лечения. Добавьте эту вторую обработку непосредственно в питательную среду.