Получение первичных культур ганглиозных клеток сетчатки из эмбрионов данио-рерио

Начните с ранней стадии развития эмбрионов данио-рерио в эмбриональных средах.

Удалите хорион, защитную мембрану, окружающую эмбрионы, и перенесите эмбрионы в свежую культуральную пластину, содержащую среду.

Удалите хвостовую часть эмбриона, затем отделите голову и аккуратно отделите глаза от головы.

Глаза содержат сетчатку, тонкий слой ткани, в котором находятся ганглиозные клетки сетчатки.

Перенесите глаза в пробирку, содержащую питательную среду для клеточных культур рыбок данио

.

Механически диссоциируйте глаза, чтобы освободить ганглиозные клетки сетчатки и сформировать одноклеточную суспензию.

Возьмите покровные листы, помещенные в культуральный планшет с питательными средами для рыбок данио

.

Покровные стекла покрыты синтетическим полимером и белком адгезии.

Перенесите ячейки в центр покровного стекла и инкубируйте.

Ганглиозные клетки сетчатки прикрепляются к покрытым поверхностям, и далее эти клетки развивают длинные выступы, называемые аксонами.

Достаньте эмбрионы рыбок данио из инкубатора и погрузите эмбрионы в 35-миллиметровую чашку для культуры тканей, содержащую 70% этанола, на 5–10 секунд для стерилизации. С помощью пипетки для переноса перенесите эмбрионы в чашку E2 Me