Рост и дифференцировка нейронов, нагруженных магнитными наночастицами, на магнитных платформах

Начните с добавления нейронных клеток в подходящую среду в чашке для культур.

Добавьте флуоресцентные магнитные наночастицы, или MNP, содержащие магнитный сердечник, помеченный флуоресцентным красителем.

Во время инкубации клетка поглощает MNP посредством эндоцитоза и намагничивается.

Поместите чистый намагниченный узорчатый субстрат в чашку для культур. Эта стеклянная подложка имеет встроенные геометрические узоры с магнитными свойствами.

Простерилизуйте подложку, подвергая ее воздействию ультрафиолета.

Покройте субстрат коллагеном, чтобы способствовать прикреплению клеток.

Добавьте загруженные MNP клетки в субстрат и инкубируйте.

Внешнее магнитное поле подложки притягивает элементы, нагруженные MNP, что позволяет их прикрепляться.

Через равные промежутки времени добавляйте среду, содержащую определенный фактор роста.

Фактор роста помогает клеткам в формировании расширений, в то время как магнитный рисунок субстрата определяет ориентацию этих расширений.

Посадите 1 миллион клеток в обычную 35-миллиметровую чашку без покрытия. Добавьте в чашку рассчитанный объем суспензии MNP и среду для дифференцировки для достижения желаемой концентрации MNP. Смешайте клетки, MNP и среду для дифференцировки, затем инкубируйте чашку в инкубаторе с 5% углекислым газом при температуре 37 градусов Цельсия в течение 24 часов.

Очистите узорчатый субстрат 70% этанолом и поместите его в 35-миллиметровую чашку для культур в вытяжке. Поместите большой магнит под узорчатую подложку на одну минуту, затем снимите его, переместив тарелку вверх и в сторону, и вытащите магнит из колпака. Включите ультрафиолет на 15 минут.

Чтобы приготовить стеклянную подложку, покрытую коллагеном, разведите коллаген типа I в соотношении 1 к 50 в 30% этаноле. Накройте стекло раствором. Оставьте посуду открытой в вытяжке на четыре часа, пока весь раствор не испарится. Затем простирайте его три раза в стерильной PBS. Извлеките клетки из инкубатора. Центрифугируйте клеточную суспензию в течение 5 минут при 200 г и выбросьте надосадочную жидкость. Ресуспендируйте клетки в 1 миллилитр свежей дифференцировочной среды, и подсчитайте клетки с помощью гемоцитометра.

Высадите 10 5 клеток поверх субстрата в 35-миллиметровую чашку для культивирования и добавьте 2 миллилитра дифференцировочной среды. Инкубируйте культуру в увлажнённом инкубаторе с 5% углекислым газом при температуре 37 градусов Цельсия. Через 24 часа добавьте в клетки от 1 до 100 свежих мышиных бета-NGF. Обновляйте среду для дифференцировки и добавляйте свежий бета-NGF каждые два дня.