Дифференцировка эмбриональных стволовых клеток человека в нейронных предшественников

Начните с многолуночного планшета, покрытого матрицей базальной мембраны, которая включает внеклеточные полимеры и белки адгезии.

Засейте лунки одноклеточной суспензией эмбриональных стволовых клеток человека в питательной среде, содержащей ингибитор ро-киназы.

Инкубируйте для присоединения стволовых клеток к матриксу.

Клетки поглощают ингибитор, который блокирует ферменты рокиназы и предотвращает апоптотическую гибель клеток.

Это способствует выживанию клеток и поддерживает их в недифференцированном состоянии.

Замените питательную среду средой для нервной индукции, богатой факторами роста и содержащей ингибиторы, нацеленные на специфические ALK-рецепторы.

Эти ингибиторы взаимодействуют со своими рецепторами и блокируют сигнальные пути BMP и TGF-β, предотвращая дифференцировку клеток в эндодермальные или мезодермальные предшественники.

Это приводит к избирательной дифференцировке стволовых клеток в эктодермальные предшественники.

Эти эктодермальные предшественники используют питательные вещества и факторы роста из среды для размножения, а затем дифференцируются в нейральные клетки-предшественники.

Пластинчатую пластину клеток на базальную мембрану матрицу, покрытую 6-луночным покрытием с плотностью 2 х 10,⁵ клеток на лунку в 2 миллилитрах mTeSR1 с 10 микромолярным ингибитором ROCK. Через 24 часа замените питательную среду средой для нервной индукции с добавлением 1 микромолярного дорсоморфина и 5 микромолярных SB431542. Меняйте среду через день в течение первых четырех дней нейронной индукции, затем каждый день, пока не будет достигнуто слияние на седьмой день.