Выделение и культивирование микроглии из мозга крыс с использованием бессывороточных сред

Возьмем перфузированный мозг крысы. Измельчите его на мелкие кусочки.

Гомогенизируйте ткань в буфере для высвобождения клеток, включая микроглию.

Как только непереваренная ткань осядет, соберите надосадочную жидкость, содержащую клетки, и добавьте буфер для разделения миелина.

Смешайте содержимое и центрифугируйте для отделения клеток от миелина и мусора. Удалите слой миелинового мусора и надосадочную жидкость.

Повторно суспендируйте клетки в буфере и пипетке, чтобы разделить комки.

Пропустите суспензию через сетчатое фильтр, чтобы удалить оставшиеся клеточные агрегаты.

Перенесите отфильтрованные клетки в культуральную пластину, покрытую моноклональными антителами, специфичными для микроглии. Инкубируйте для облегчения адгезии микроглии.

Промойте буфером, чтобы удалить неадгезивные клетки. Добавьте трипсин и инкубируйте, чтобы ослабить микроглию.

Удалите трипсин.

Добавьте не содержащий сыворотки питатель. Инкубируйте на льду, чтобы ослабить взаимодействие клеток и субстрата.

Пипеткой и соберите суспензию в пробирку. Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте микроглию в среде, не содержащей сыворотки, и перенесите на многолуночную пластину, покрытую коллагеном