Препарирование срезов головного мозга методом защитного восстановления на основе NMDG

Начнем с изолированного мозга. Быстро погрузите мозг в предварительно охлажденную искусственную спинномозговую жидкость или ФКСГ, чтобы приостановить метаболические процессы.

ФКБ содержит NMDG, большой органический катион, который уменьшает повреждение и гибель нейрональных клеток.

aCSF также содержит HEPES, который поддерживает pH и концентрацию соли и предотвращает набухание и повреждение клеток.

Перенесите мозг на чашку Петри, содержащую фильтровальную бумагу.

Обрежьте мозг для получения нужной области.

Зафиксируйте мозговой блок в держателе образца с помощью подходящего клея и вставьте его в агарозу.

Поместите держатель образца в срез.

Наполните резервуар слайсера предварительно охлажденным aCSF и проветривайте раствор, чтобы обеспечить оптимальную подачу кислорода.

Получите участки мозгового блока.

Переложите срезы в предварительно разогретый аКСФ, чтобы перезапустить метаболические процессы, дающие возможность срезам восстановиться.

Аккуратно выньте неповрежденный мозг в стакан с предварительно охлажденным NMDG-HEPES aCSF и дайте мозгу равномерно остыть в течение примерно 1 минуты. Теперь с помощью большого шпателя перенесите мозг из стакана на чашку Петри, накрытую фильтрова