Выделение и культивирование взрослых нейральных стволовых клеток из субкаллозальной зоны мыши

Начнем с мышиного мозга на охлажденной мозговой матрице.

Получите срезы, содержащие субкаллозальную зону или ЗКН. Переложите секцию в холодный фосфатный буфер.

Под препарирующим микроскопом вырезаем участок ЗКН.

Рассеченный ЗКН нарезать на более мелкие кусочки.

Переложите эти кусочки в буфер для разложения. Инкубируйте для диссоциации клеток из ткани.

Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость. Ресуспендируйте клетки в подходящей среде.

Перенесите клетки в культуральную тарелку и добавьте определенные факторы роста.

Взрослые нервные стволовые клетки делятся, образуя кластеры, называемые нейросферами.

Неправильное распределение питательных веществ в клеточных кластерах ограничивает рост клеток.

Чтобы диспергировать кластеры, центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость. Восстановите суспензию кластеров в буфере диссоциации и инкубируйте.

Пипетируйте раствор вверх и вниз, чтобы получить отдельные клетки.

Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость.

Повторно суспендируйте клетки и перенесите их в подходящую среду для получения монослоя.

После препарирования перенесите мозг мыши в холодный буфер PBS и дважды промойте его, чтобы удалить лишнюю кровь. Затем поместите мо