Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 1:44 мин. • July 8th, 2025
Возьмите чашку для культур, покрытую субстратом для клеточных культур для облегчения клеточной адгезии.
Чашка содержит однолуночный вкладыш для культуры без основания, прикрепленного к его центру, что создает определенный отсек. Контур этого отсека отмечен на чашке для наблюдения за миграцией клеток.
Введите клеточную суспензию в компартмент, который содержит перивентрикулярные эндотелиальные клетки или ПВЭК, клетки, выстилающие кровеносные сосуды в мозге, и интернейроны, которые мигрируют вдоль ПВЭК во время развития мозга.
Добавьте в чашку среду для совместной культуры для поддержания влажности и инкубируйте, чтобы облегчить прилипание клеток к субстрату.
Снимите вкладыш, чтобы устранить физический барьер; обновите среду и снова инкубируйте.
ПВЭК пролиферируют, расширяя сеть эндотелиальных клеток за пределы границы вставки.
PVEC выделяют факторы, которые действуют как направляющие сигналы, направляя интернейроны на миграцию по сети PVEC.
Кокультура, демонстрирующая миграцию между нейронами, готова к анализу.
Для проведения ко-культурального анализа суспензируют 30 000 ГАМКергических интернейронов и 30 000 перивентрикулярных эндотелиальных клеток человека в 70 микролитрах среды для совместного культивирования. Затем засейте этот раствор ячейки в отсек с одной лункой. Через 48 часов извлеките вкладыш. Инкубируйте сокультуру при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа в течение пяти дней.