Получение зрелых органоидов мозжечка из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с использованием одноразовых биореакторов

Засейте индуцированные плюрипотентные стволовые клетки человека, или ИПСК, в биореакторе. ИПСК ресуспендируются в средах, содержащих клеточный ингибитор апоптоза.

Под действием магнитного поля вертикальное колесо биореактора вращается с контролируемой скоростью, облегчая межклеточный контакт и образование агрегатов. Удалите большую часть среды и добавьте свежую среду без ингибитора.

Продолжайте культивирование. Как только агрегаты достигнут оптимального размера, дайте им осесть под действием силы тяжести. Удалите среду.

Добавляют дифференцировочные среды, содержащие факторы роста, и культуру с уменьшенной частотой вращения колеса биореактора. Факторы роста способствуют нейронной дифференцировке внутри агрегатов.

Далее добавляют свежую среду с добавками факторов роста и хемокинами, индуцирующими развитие предшественников мозжечка.

Постепенно предшественники мозжечка организуются в отдельные слои внутри агрегатов, образуя ранние мозжечковые органоиды.

Наконец, добавьте нейронную среду, содержащую специфические нейротрофические факторы.

Эти факторы индуцируют созревание предшественника мозжечка в синаптически активные функциональные нейроны мозжечка, генерируя зрелые органоиды.

В день