Создание трехмерной культуры глиальных клеток мозга крысы

Возьмите микропланшет с адгезивной культурой глиальных клеток, полученных из мозга крысы. Культура содержит астроциты, микроглию и олигодендроциты.

Извлеките среду, инкубируйте с ферментным раствором, чтобы отделить клетки, а затем перенесите их в пробирку.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость с клеточным мусором. Ресуспендируйте клетки в теплой среде.

Растирать с помощью шприца для разрушения клеточных комков и фильтровать с помощью ситечка для получения одноклеточной суспензии.

Добавьте фотосшиваемый биополимер, сшивающие агенты и компоненты внеклеточного матрикса.

Вылейте смесь в форму, прикрепленную к покровному стеколу. Подвергните смесь воздействию света высокой интенсивности, чтобы вызвать сшивку, образуя гель и инкапсулируя глиальные клетки.

Снимите форму и поместите покровные стекла в микропланшет. Добавьте теплую среду и инкубируйте гель в физиологических условиях.

Клетки пролиферируют в поддерживающем внеклеточном матриксе и создают клеточную сеть, создавая трехмерную культуру глиальных клеток.

За 24 часа до инкапсуляции клеток аспирируйте среду из двухнедельных первичных культур и добавьте по 1 миллилитру свежей среды в каждую лунку. В день инкапсуляции клето