Создание и поддержание астросфер с использованием плюрипотентных стволовых клеток человека

Начните с планшета, покрытого ВКМ, и семенных кластеров плюрипотентных стволовых клеток человека в питательной среде, содержащей ингибиторы ро-киназы.

ЭКМ усиливает прикрепление клеток, в то время как ингибиторы блокируют рокиназы, предотвращая апоптотическую гибель клеток и способствуя выживанию и пролиферации клеток.

Введите среду для нейронной дифференцировки, чтобы индуцировать дифференцировку стволовых клеток в нейральные клетки-предшественники.

Обработайте отслойочным раствором; ферменты в этом растворе ухудшают ВКМ и контакт с клетками, высвобождая клетки.

Переложите их в колбу без оболочки, содержащую ингибиторы рокиназы.

Ингибиторы способствуют выживанию клеток и спонтанной агрегации в трехмерные структуры или сфероиды.

Дополните сфероиды средой для нервной дифференцировки, богатой фактором роста, что позволит нейронным клеткам-предшественникам дифференцироваться в предшественников астроцитов и формировать астросферы.

Регулярно добавляйте раствор для разделения астросфер на более мелкие скопления. Это позволяет питательным веществам достигать внутренних клеток сфероида и поддерживать их жизнеспособность.

Поддерживайте астросферы в свежей среде, чтобы их предшественники мог