Дифференцировка нетрансгенных и трансгенных плюрипотентных стволовых клеток человека в нейральные клетки-предшественники

Возьмите многолуночный планшет, покрытый внеклеточным матриксом, или ВКМ.

В отдельные лунки введите нетрансгенные и трансгенные плюрипотентные стволовые клетки человека, или hPSCs, в культуральную среду.

Трансгенные ПСК несут трансген под антибиотик-индуцируемым промотором. Трансген кодирует транскрипционный фактор, который индуцирует нейронную дифференцировку.

Инкубируйте для облегчения адгезии клеток к ВКМ. Малые молекулы в среде препятствуют апоптозу, способствуя пролиферации клеток.

Добавьте раствор для отслойки клеток; добавьте среду, чтобы остановить диссоциацию, а затем перенесите их на другую микропластину с покрытием ECM, чтобы обеспечить пролиферацию клеток.

Введите нейродифференцировочную среду, содержащую малые молекулы, в нетрансгенные клетки и антибиотик-индуктор в трансгенные клетки.

Малые молекулы побуждают нетрансгенные клетки дифференцироваться в нейральные клетки-предшественники или NPC. В трансгенных клетках индуцированная антибиотиками экспрессия транскрипционного фактора активирует гены, необходимые для дифференцировки в NPC.

Поддерживайте NPC в культуре для последующих применений.

Для получения нетрансгенных нейронных предшественников и нейронов, или hNeurons