Генерация 3D сфер совместного культивирования астроцитов и нейронов для индуцирования образования синапсов

Возьмите многолуночную пластину, покрытую поверхностно-активным веществом для снижения поверхностного натяжения лунки.

Добавьте нужное соотношение астроцитов и нейронов в подходящую питательную среду.

Центрифуга для отстаивания клеток и затем инкубируется.

Низкое поверхностное натяжение предотвращает прилипание ячеек к поверхности лунки, вызывая их агрегацию.

Клетки прилипают друг к другу посредством различных мембранных взаимодействий, в том числе молекул адгезии, образуя 3D-сферу кокультуры.

Соберите шарики и переложите их в трубку.

Дайте сферам осесть. Удалите надосадочную жидкость и добавьте свежую питательную среду.

Переложите шарики в колбу с подходящей питательной средой и инкубируйте с постоянным вращением.

В сфере нейроны расширяют проекции друг к другу, образуя соединение, называемое синапсом, в то время как астроцит простирается к синапсу, устанавливая тесную связь с нейронами.

Добавьте нужное соотношение диссоциированных hAstros и hNeurons или iNeurons в общем объеме два миллилитра к каждой лунке микропланшета. Центрифугируйте планшет при 100 раз g в течение трех минут, и верните в инкубатор на двое суток.

Через сутки в пластине должны образоваться плотно упакованные ми