Получение шванновских клеток, подобных клеткам, из стромальных клеток костного мозга

Начните с адгезивной культуры стромальных клеток костного мозга.

Подвергайте клетки гипоксии, состоянию, характеризующемуся снижением уровня кислорода, в течение необходимого времени.

Изолируйте клетки, предварительно подготовленные к гипоксии, затем центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость. Ресуспендируйте клетки в нейрональных средах-предшественниках, содержащих факторы роста нейронов.

Перенесите клетки в культуральную тарелку с низким уровнем прикрепления и инкубируйте.

Гипоксия-прекондиционирование и факторы роста нейронов индуцируют дифференцировку стромальных клеток в предшественников нейронов.

Поверхность пластины с низким уровнем прикрепления поддерживает предшественников во взвешенном состоянии, способствуя их пролиферации и агрегации в трехмерные нейросферы.

Соберите нейросферы, центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость. Ресуспендируйте клетки в глиальных индукционных средах, содержащих глиа-специфические факторы роста.

Перенесите нейросферы в культуральную пластину, покрытую ламинином, компонентом внеклеточного матрикса, и поли-D-лизином, положительно заряженным синтетическим полимером.

Покрытая поверхность способствует адгезии клеток, облегчая прикрепление