Выделение нейронов DRG и кокультура с предшественниками шванновских клеток для получения шванновских клеток

0 просмотров4:25 мин • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Возьмите спинной мозг эмбриона крысы с прикрепленными ганглиями дорсальных корешков, или DRG, содержащими нейроны и глиальные клетки.

Отсоедините отдельные DRG от шнура, перенесите их в пробирку и центрифугируйте, отбросив остатки ткани.

Добавьте ферменты для диссоциации нейронов DRG и глиальных клеток.

Раскрутите ячейки вниз и удалите любой мусор. Добавьте питательную среду для нейронов и растирайте для получения суспензии одиночных клеток.

Перенесите суспензию в микропланшет, покрытый культуральным субстратом, способствующим адгезии клеток.

Введите очистительную среду и инкубируйте. Ингибирующие агенты среды устраняют делящиеся глиальные клетки, в то время как неделящиеся нейроны выживают.

Возьмем шванновские клеточные клетки, или МРЛ, в среде для совместного культивирования. МРЛ, предшественники шванновских клеток, взаимодействуют с эмбриональными периферическими нервными нейронами.

Введите суспензию на нейроны DRG и инкубируйте. Взаимодействие МРЛ с нейронами DRG способствует их созреванию в шванновские клетки.

Сгенерированные шванновские ячейки готовы к анализу.

Чтобы собрать ганглии дорсального корня, перенесите первый эмбрион в 10-сантиметровую чашку для культивирования, содержащую PBS комнатной температуры, под препарирующий микроскоп в положении лежа и вставьте микрорассекающие щипцы по обе стороны спинного мозга.

С помощью тупого рассечения отделите спинной мозг от окружающих мягких тканей, с помощью щипцов иссекайте спинной мозг вдоль отверстия шеи и хвостового отрезка. Удалите остаточные мягкие ткани из освобожденного спинного мозга до тех пор, пока не останутся только спинной мозг, нервные корешки и прикрепленный ганглий дорсального корешка.

Отделите отдельные ганглии дорсальных корешков от их соединительных нервных корешков. Затем с помощью ручки-пипетки, оснащенной наконечником для пипетки объемом 1 миллилитров, перенесите до 100 ганглиев дорсальных корешков в 1,5-миллилитровую микроцентрифужную пробирку PBS.

Соберите ганглии центрифугированием и повторно суспендируйте гранулы в 200 микролитрах рекомбинантного реагента для диссоциации ферментативных клеток на пробирку. Через 10 минут при температуре 37 градусов Цельсия снова центрифугируйте ганглии заднего корешка с помощью наконечника пипетки объемом 200 микролитров, чтобы аккуратно растирать гранулы в среде для поддержания постганглионарных нейронов дорсального корня.

Засейте ганглиозные клетки дорсального корешка в соотношении 5 x 103 клеток на квадратный сантиметр в шестилуночные планшеты, покрытые ламинином Poly-D-лизина, в 1,5 мл среды для поддержания нейронов ганглиозных нейронов дорсального корешка в каждой лунке.

После двух дней в культуре при 37 градусах Цельсия и 5%CO2 промойте клетки и верните культуры нейрональных клеток в инкубатор в свежей среде для очистки нейронов ганглиозов дорсального корня еще на два дня.

После 3-4 циклов поддержания и очистки культуры ганглиозных клеток дорсального корешка должны дать положительный результат на нейрональный маркер Tuj-1 и отрицательный результат на маркер глиальных клеток S100 beta.

На 7-й день шванновской клеточной культуры промывают клетки в PBS с последующей диссоциацией 0,5 мл рекомбинантного реагента для ферментативной диссоциации клеток в лунку при 37 градусах Цельсия в течение 5 минут. Ресуспендируйте клеточную гранулу в среде для совместной культивирования и высадите шванновские клетки, подобные им, на очищенную культуру ганглиозных нейронов дорсального корешка в соотношении 1 x 10,3 клетки на квадратный сантиметр в течение 14 дней совместного культивирования при 37 градусах Цельсия и 5%CO2.

07:22

Быстрая изоляция дорсал Корень Ganglion Макрофаги

Похожие видео

0 Просмотры

08:57

Миелинизация периферических аксонов in vitro в кокультуре ганглиозных эксплантатов дорсальных корешков крыс и шванновских клеток

Похожие видео

0 Просмотры

04:20

Процедура криосекции ганглия заднего корешка мыши

Похожие видео

0 Просмотры

09:19

Исследование глиальных Влияние неоднородности сотовый на рост Axon Использование нового метода Coculture

Похожие видео

0 Просмотры

04:16

Выделение и культивирование первичных шванновских клеток из дермы человека

Похожие видео

0 Просмотры

03:44

Совместное культивирование шванновских клеток с нейронами DRG на предварительно растянутой мембране

Похожие видео

0 Просмотры

03:45

Выделение шванновских клеток из спинномозговых корешков мышей

Похожие видео

0 Просмотры

02:11

Совместное культивирование экспланта ганглия дорсального корня с шванновскими клетками для миелинизации нейронов

Похожие видео

0 Просмотры

03:37

Изоляция сенсорных нейронов и совместное культивирование с естественными клетками-киллерами

Похожие видео

0 Просмотры

09:17

Спинных нейронов и дифференцированных жировой стволовых клеток, полученных: In Vitro Co-культура моделью для изучения периферических нервов Регенерация

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 15 августа 2026