Выделение нейронов DRG и кокультура с предшественниками шванновских клеток для получения шванновских клеток

Возьмите спинной мозг эмбриона крысы с прикрепленными ганглиями дорсальных корешков, или DRG, содержащими нейроны и глиальные клетки.

Отсоедините отдельные DRG от шнура, перенесите их в пробирку и центрифугируйте, отбросив остатки ткани.

Добавьте ферменты для диссоциации нейронов DRG и глиальных клеток.

Раскрутите ячейки вниз и удалите любой мусор. Добавьте питательную среду для нейронов и растирайте для получения суспензии одиночных клеток.

Перенесите суспензию в микропланшет, покрытый культуральным субстратом, способствующим адгезии клеток.

Введите очистительную среду и инкубируйте. Ингибирующие агенты среды устраняют делящиеся глиальные клетки, в то время как неделящиеся нейроны выживают.

Возьмем шванновские клеточные клетки, или МРЛ, в среде для совместного культивирования. МРЛ, предшественники шванновских клеток, взаимодействуют с эмбриональными периферическими нервными нейронами.

Введите суспензию на нейроны DRG и инкубируйте. Взаимодействие МРЛ с нейронами DRG способствует их созреванию в шванновские клетки.

Сгенерированные шванновские ячейки готовы к анализу.

Чтобы собрать ганглии дорсального корня, перенесите первый эмбрион в 10-сантиметровую чашку для культивирования, сод