Метод in vitro для создания астроцитарных скаффолдов в гидрогелевых микроколонках

Возьмем чашку для культивирования, содержащую лодочку с микроколонной, состоящую из полых трубок определенного диаметра.

Микроколонки, изготовленные из гидрогеля, заполнены буфером для предотвращения высыхания.

Под стереомикроскопом удалите буфер и добавьте ледяной раствор коллагена, входящий в состав внеклеточного матрикса.

Внесите фильтрующий материал вдоль внутреннего края формы, чтобы поддерживать увлажненность колонны. Инкубируйте в физиологических условиях, чтобы коллаген полимеризовался, образуя покрытие внутри микроколонок.

Добавьте астроциты внутрь микроколонок и инкубируйте, чтобы способствовать адгезии астроцитов к коллагену.

Далее наполните блюдо средой и поддерживайте ее в физиологических условиях.

Благодаря узкому диаметру микроколонок астроциты приобретают биполярную морфологию с процессами, распространяющимися по длине.

Со временем астроциты самоорганизуются, образуя трехмерный каркас, содержащий плотные пучки астроцитарных процессов.

Каркас астроцитов, покрытый гидрогелем, готов к последующим анализам.

В шкафу биобезопасности приготовьте 1 миллиграмм на миллилитр раствор коллагена типа I типа крысиного хвоста в среде для совместной культуры, а затем поместите его н