Реллирование дифференцированных нейронов, полученных из плюрипотентных стволовых клеток человека

Начните с большой культуральной пластины, содержащей дифференцированные нейроны, полученные из плюрипотентных стволовых клеток человека, с плотной нейронной сетью.

Инкубируйте эти нейроны с помощью мягких протеолитических ферментов, чтобы отделить их от пластины, подняв их как лист.

При продолжении инкубации ферменты частично нарушают клеточные связи, ослабляя нейронные сети.

Добавьте питательную среду, чтобы остановить активность фермента.

Многократно пипетируйте оторвавшиеся нейроны, чтобы отделить их друг от друга.

Отфильтруйте нейроны через клеточный фильтр, чтобы удалить клеточные скопления и собрать отдельные нейроны.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость. Повторно суспендируйте их в питательной среде.

Для повторного покрытия эти нейроны помещаются на полимер и многолуночную пластину, покрытую адгезионным белком. Высиживайте яйца, чтобы обеспечить их прикрепление.

Нейроны используют питательные вещества из среды, чтобы оставаться жизнеспособными. Регулярно заменяйте питательную среду для поддержания уровня питательных веществ.

Инкубируйте дальше, чтобы обеспечить созревание нейронов и формирование связей между ними.

Начните с аккуратного промывания пластины дифферен