Разработка моторных нервных органоидов человека, полученных из iPSC, с использованием микрофлюидного чипа

Возьмем, к примеру, индуцированные плюрипотентные стволовые клетки человека, или ИПСК в богатой питательными веществами среде стволовых клеток с ингибиторами ро-киназы.

Ингибиторы проникают в клетки и блокируют ферменты ро-киназы, предотвращая апоптотическую гибель клеток.

Клетки используют питательные вещества для пролиферации и спонтанной агрегации, образуя трехмерный клеточный кластер, называемый сфероидом.

Постепенно заменяйте среду на среду нейронной индукции. Сигнальные модуляторы из среды стимулируют дифференцировку стволовых клеток в нервные клетки.

Замените ее нервной средой, богатой фактором роста, чтобы дифференцировать сфероидные клетки в моторные нейроны и сформировать сфероид моторных нейронов или MNS.

Перенесите эти MNS на микрофлюидный чип с полимерным покрытием, содержащий среду для созревания.

Факторы роста нервов в среде стимулируют аксоны или более длинные проекции нейронов расти из сфероида и распространяться по микроканалу чипа.

Так образуется органоид двигательного нерва, трехмерная модель двигательной нервной ткани.

Чтобы индуцировать дифференцировку 3D iPS-клеток в моторные нейроны, засейте 4 x 10⁴ iPS-клеток на лунку в соответствующее количество лунок 96-л