Стимуляция дифференцировки нервных стволовых клеток с помощью лечения холодной атмосферной плазмой

Начните с нервных стволовых клеток, культивируемых на покровном листе, покрытом внеклеточным матриксом, в подходящей среде для дифференцировки.

Возьмите шприц, содержащий холодную плазму, которая представляет собой состояние вещества, содержащего различные реактивные компоненты, в том числе ультрафиолетовое излучение и заряженные частицы.

Расположите сопло плазменного шприца на определенной высоте над культурой нервных клеток.

Запустите плазменную струю.

Плазма взаимодействует с нервными стволовыми клетками, активируя их.

Удалите старую питательную среду. Добавьте свежую питательную среду и инкубируйте.

Со временем активированные нервные стволовые клетки производят проекции.

Выбросьте носитель.

Под микроскопом с инвертированным фазово-контрастным светом наличие на клетках удлиненных проекций, напоминающих те, что находятся в нервной клетке, указывает на дифференцировку.

Чтобы лечить плазмой нейральные стволовые клетки, установите расстояние между насадкой шприца и первой лункой клеток на 15 миллиметров. Замените надосадочную жидкость в культурах нейральных стволовых клеток 800 микролитрами свежей среды для дифференцировки и поместите планшет под струи плазмы.

Убедившись, что сопло шприца закреплено над центром каждой лунки, создайте три лунки с плазмой на 60 секунд на обработку и три лунки с 1% гелием и газообразным кислородом на 60 секунд на обработку, оставив три лунки необработанными в качестве контрольных. Затем замените надосадочную жидкость одним миллилитром свежей дифференцировочной среды, и верните клетки в инкубатор на шесть дней. Ежедневно проверяйте состояние дифференцировки различных групп под микроскопом с инвертированным фазово-контрастным светом.

После обработки дайте клеткам полностью сбалансироваться в кондиционированной среде в течение примерно одного часа, прежде чем заменить надосадочную жидкость свежей средой для дифференцировки.