Генерация предшественников корковых интернейронов из эмбриональных стволовых клеток мыши

Возьмите эмбриональные стволовые клетки мыши, взвешенные в бессывороточных средах, содержащих низкомолекулярные ингибиторы.

Поместите клетки на неадгезивную культуральную пластину, позволяя им размножаться и агрегировать с образованием трехмерных эмбриоидных тел или БЭ.

Кроме того, ингибиторы блокируют ненейрональные сигнальные пути и индуцируют дифференцировку эмбриональных стволовых клеток в сторону корковой нервной судьбы.

Перенесите БЭ в пробирку, центрифугу и удалите надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте БЭ в растворе, содержащем коктейль ферментов и ДНКазу.

Ферменты диссоциируют БЭ в отдельные клетки, в то время как ДНКаза разлагает загрязняющую ДНК.

Добавьте бессывороточные среды, содержащие ингибиторы, чтобы остановить ферментативную активность, затем центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость, содержащую ферменты.

Ресуспендируйте клетки в средах, содержащих низкомолекулярные ингибиторы, и перенесите их на культуральные планшеты, покрытые факторами адгезии.

Ячейки прикрепляются к поверхности пластины с покрытием.

Ингибиторы предотвращают гибель апоптотических клеток и индуцируют клеточную дифференцировку в предшественников корковых интернейронов.

Начните выращивать кл