Прямое перепрограммирование гемопоэтических клеток-предшественников в нейральные стволовые клетки

Начните с клеточной суспензии генетически измененных гемопоэтических клеток-предшественников.

Эти клетки экспрессируют факторы транскрипции, необходимые для их перепрограммирования в нейральные стволовые клетки. Этот процесс называется прямым перепрограммированием.

Перенесите клетки в многолуночную пластину, покрытую внеклеточным матриксом, с нейральной средой-предшественником и инкубируйте.

Внеклеточный матрикс обеспечивает трехмерный каркас для прикрепления и роста клеток.

Во время инкубации факторы транскрипции, экспрессируемые клеткой-предшественником кроветворения, инициируют последовательность молекулярных событий, которые позволяют ей трансформироваться в нейральную стволовую клетку.

Нейральная среда-предшественник содержит факторы, способствующие выживанию индуцированных нейральных стволовых клеток.

После инкубации замените эту среду свежей средой-предшественником нервной системы, чтобы способствовать размножению клеток.

Отделите ячейки с помощью скребка для ячеек.

Соберите эту суспензию и перенесите клетки в лунку, содержащую среду нейральных стволовых клеток.

Инкубация для поддержания индуцированных нейральных стволовых клеток.

Когда клетки сливаются на 30-50%, аспирируйт