Выделение индуцированных колоний нейральных клеток-предшественников, полученных из фибробластов взрослого человека

Начните с адгезивной культуры индуцированных колоний нейральных клеток-предшественников, полученных из фибробластов взрослого человека в многолуночном планшете, покрытом ламинином.

Промойте колонии буфером, чтобы удалить неадгезивные клетки, затем добавьте свежий буфер.

Соскребите отдельные колонии, чтобы удалить окружающие клетки.

Переведите колонии в свежие лунки, покрытые ламинином, содержащие нейроиндукционную среду.

Механически дезагрегируйте колонии для получения одноклеточной суспензии.

Ламинин, белок внеклеточного матрикса, взаимодействует с поверхностными белками предшественников, способствуя адгезии клеток к поверхности лунки.

Добавьте низкомолекулярный ингибитор, который проникает в клетки и блокирует специфические протеинкиназы, предотвращая клеточный апоптоз.

Факторы роста и малые молекулы, присутствующие в нейроиндукционной среде, способствуют пролиферации предшественников.

Периодически заменяйте среду для восполнения питательных веществ, способствуя продолжению пролиферации предшественников.

Конфлюентная культура, или полностью покрытый клеточный слой, указывает на успешную экспансию индуцированных нейральных клеток-предшественников.

Через сутки аспирируйте ламинин и